Browsing by Author "Karabay, Arzu Zeynep"

Now showing 1 - 5 of 5
  • No Thumbnail Available
    Item
    Food additive sodium benzoate (NaB) activates NFκB and induces apoptosis in HCT116 cells
    (2018) Karabay, Arzu Zeynep; Yılmaz, Betül; Eczacılık Fakültesi
    NaB, the metabolite of cinnamon and sodium salt of benzoic acid is a commonly used food and beverage preservative. Various studies have investigated NaB for its effects on different cellular models. However, the effects of NaB on cancer cell viability signaling is substantially unknown. In this study, the effects of NaB on viability parameters and NF kappa B, one of the most important regulators in apoptosis, were examined in HCT116 colon cancer cells. Cell culture, light microscopy, spectrophotometry, flow cytometry, and western blot were used as methods to determine cell viability, caspase-3 activity, NF kappa B, Bcl-xl, Bim, and PARP proteins, respectively. NaB (6.25 mM-50 mM) treatment inhibited cell viability by inducing apoptosis, which was evident with increased Annexin V-PE staining and caspase-3 activity. NF kappa B activation accompanied the induction of apoptosis in NaB treated cells. Inhibition of NF kappa B with BAY 11-7082 did not show a pronounced effect on cell viability but induced a more apoptotic profile, which was confirmed by increased PARP fragmentation and caspase-3 activity. This effect was mostly evident at 50 mM concentration of NaB. Bcl-xl levels were not affected by NaB or BAY 11-7082/NaB treatment; whereas, total Bim increased with NaB treatment. Inhibition of NF kappa B activity further increased Bim levels. Overall, these results suggest that NaB induces apoptosis and activates NF kappa B in HCT116 colon cancer cells. Activation of NF kappa B emerges as target in an attempt to protect cells against apoptosis.
  • No Thumbnail Available
    Item
    Food Additive Sodium Benzoate (NaB) Activates NFκB and Induces Apoptosis in HCT116 Cells
    (2018) Yılmaz, Betül; Karabay, Arzu Zeynep; Eğitim Bilimleri Fakültesi
    NaB, the metabolite of cinnamon and sodium salt of benzoic acid is a commonly used food and beverage preservative. Various studies have investigated NaB for its effects on different cellular models. However, the effects of NaB on cancer cell viability signaling is substantially unknown. In this study, the effects of NaB on viability parameters and NFκB, one of the most important regulators in apoptosis, were examined in HCT116 colon cancer cells. Cell culture, light microscopy, spectrophotometry, flow cytometry, and western blot were used as methods to determine cell viability, caspase-3 activity, NFκB, Bcl-xl, Bim, and PARP proteins, respectively. NaB (6.25 mM–50 mM) treatment inhibited cell viability by inducing apoptosis, which was evident with increased Annexin V-PE staining and caspase-3 activity. NFκB activation accompanied the induction of apoptosis in NaB treated cells. Inhibition of NFκB with BAY 11-7082 did not show a pronounced effect on cell viability but induced a more apoptotic profile, which was confirmed by increased PARP fragmentation and caspase-3 activity. This effect was mostly evident at 50 mM concentration of NaB. Bcl-xl levels were not affected by NaB or BAY 11-7082/NaB treatment; whereas, total Bim increased with NaB treatment. Inhibition of NFκB activity further increased Bim levels. Overall, these results suggest that NaB induces apoptosis and activates NFκB in HCT116 colon cancer cells. Activation of NFκB emerges as target in an attempt to protect cells against apoptosis. © 2018 by the authors.
  • No Thumbnail Available
    Item
    Metilsülfonilmetan, glukozamin ve kondroitin sülfatın LPS/IFN-? ile uyarılmış RAW 264.7 makrofaj hücrelerinde apoptoz üzerine etkileri
    (Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 2011) Karabay, Arzu Zeynep; Büyükbingöl, Zeliha; Other
    Apoptosis is a genetically programmed cell death mechanism which plays important role in normal physiology such as tissue homeostasis regulation and pathophsiology of various diseases. Apoptosis occurs mainly via two pathways, intrinsic and extrinsic. iNOS enzyme activation and nitric oxide synthesis in various cell types as a defense mechanism against microbial and viral pathogens plays important role in inflammatory and immune pathologies such as atherosclerosis, rheumatoid arthritis, diabetes, septic shock and multiple sclerosis, highly and uncontrolled production of nitric oxide leads to cell death. Recently, MSM and GA and CS which are acclaimed to be beneficial for inflammatory disorders arthritis and romatoid arthritis are used widely clinically. There is limited information regarding the effect mechanisms of MSM on apoptotic pathways. Furthermore as these three chemical agents are widely prescript together, it is important to analyse the effects of MSM, GA and CS both alone and in combination. In this study, effects of different concentrations of MSM, GA and CS alone or in combination were tested on LPS/IFN? activated RAW 264.7 macrophages. Fort his purpose nitrite levels, cell viability, caspase-3 activity, mitochondria membran potential and flow cytometric analysis with Annexin V-PI cell staining was performed. All of the compounds tested inhibited nitrite levels, most potent inhibition was achieved with 100 mM MSM. MSM acted as apoptotic or antiapoptotic in LPS/IFN? activated macrophages depending on the dose tested whereas GA increased mitochondrial membrane potential, decreased caspase-3 enzyme activity and exhibited antiapoptotic effects. CS did not effect any apoptotic revealers alone, however its combination with MSM and/or GA showed antiapoptotic effects which might be largely attributed to GA. As the inhibitor effect of GA on activated cells is not potent, the antiapoptotic effects of GA is partly nitric oxide dependent however nitric oxide independent pathways are thought to be responsible. MSM and GA both inhibited NO levels but they showed opposite effects in terms of cell viability and apoptosis. This can be explained with activation of various different biological signal pathways in macrophages with LPS/IFN? and the probable effects of the chemicals on different signaling pathways. In this regard, further elaborate studies are needed to clarify the effects of MSM, GA and CS on mechanisms in specific pathways.
  • No Thumbnail Available
    Item
    Metilsülfonilmetan, glukozamin ve kondroitin sülfatın LPS/IFN-y ile uyarılmış RAW 264.7 makrofaj hücrelerinde apoptoz üzerine etkileri
    (Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 2011) Karabay, Arzu Zeynep
    Apoptoz, doku homeostazisinin düzenlenmesi gibi normal fizyolojide ve çeşitli hastalıkların patofizyolojisinde önemli rol oynayan, genetik olarak programlanmış bir hücre ölüm mekanizmasıdır. Apoptoz, içsel ve dışsal olmak üzere başlıca iki yolak aracılığı ile gerçekleşir. Birçok hücre tipinde mikrobiyal ve viral patojenlere karşı savunma mekanizması olarak iNOS enziminin aktivasyonu sonucunda sentezlenen nitrik oksit, apoptozun içsel yolak aracılı indükleyicileri arasında yer almaktadır. Nitrik oksitin kontrolsüz üretimi, apoptotik yolakların da etkin olduğu ateroskleroz, romatoid artrit, diyabet, septik şok ve multipl skleroz gibi inflammatuvar ve immün patolojilerde rol oynamaktadır. Son yıllarda, özellikle temelinde inflamatuvar bozuklukların yattığı artrit ve romatoid artrit tedavisinde yarar sağladığı öne sürülen MSM ve MSM ile kombine preparatları bulunan GA ve CS klinikte yaygın olarak kullanılmaktadır. Literatürde MSM' nin apoptotik yolaklar üzerindeki etki mekanizmalarına ilişkin yeterli bilgi bulunmamaktadır. Ayrıca, klinikte bu üç kimyasal maddenin farklı kombine formlarının kullanılıyor oluşu, tek başına sergiledikleri etkilerin yanı sıra kombine olarak uygulanmaları durumunda sergiledikleri etkilerin belirlenmesini önemli kılmaktadır. Bu çalışmada, MSM, GA ve CS' nin farklı konsantrasyonlarda tek başına ve/veya kombine uygulandıklarında LPS/IFN? ile aktive RAW 264.7 makrofajlarda apoptoz üzerine olan etkileri belirlenmiştir. Bu amaçla, nitrit düzeyleri ve hücre canlılığı tayin edilmiş ve apoptozun belirteçleri arasında yer alan kaspaz-3 aktivitesi, mitokondri membran potansiyeli ve Ann V-PI ile akım sitometrik analizler gerçekleştirilmiştir. Kimyasal maddelerin tamamı nitrit düzeyleri üzerinde inhibe edici etki göstermişler, en etkin inhibisyon 100 mM MSM ile gerçekleşmiştir. MSM' nin LPS/IFN? ile aktive RAW 264.7 makrofajlarda doz bağımlı olarak apoptotik ya da antiapoptotik olarak davrandığı, GA' nın ise uygulanan bütün dozlarda mitokondri membran potansiyelini arttırdığı, kaspaz-3 enzim aktivitesini azalttığı ve antiapoptotik etkiler gösterdiği belirlenmiştir. CS, tek başına uygulanması durumunda apoptotik belirteçler üzerine etki göstermezken MSM ve GA ile kombine formları antiapoptotik etkiler göstermiştir. Kombine formlarda gözlenen antiapoptotik etkilerin büyük ölçüde GA' nın etkisinden kaynaklanabileceği düşünülmektedir. GA' nın aktive hücrelerde nitrit düzeylerinde yarattığı inhibisyonun çok güçlü olmaması nedeniyle antiapoptotik etkilerine kısmen nitrit sentezi üzerine olan etkilerinin aracılık ettiği, bununla birlikte nitrik oksit bağımlı olmayan yolakların da görev yaptığı düşünülmektedir. MSM ve GA' nın nitrit üretimi üzerinde inhibitör etkiler sergilerken hücre canlılığı ve apoptoz üzerine birbirinden farklı etkiler göstermeleri ise makrofajlarda LPS/IFN? uyarımı ile aktive olan çok sayıda biyolojik sinyal yolağının bulunması ve sözü geçen kimyasal maddelerin olasılıkla farklı sinyal yolaklarına etkileri ile açıklanabilir. Bu nedenle MSM, GA ve CS' nin spesifik yolaklar üzerine olan etkilerini aydınlatmak üzere mekanizmaya yönelik daha ayrıntılı çalışmaların yapılması gerekmektedir.AbstractApoptosis is a genetically programmed cell death mechanism which plays important role in normal physiology such as tissue homeostasis regulation and pathophsiology of various diseases. Apoptosis occurs mainly via two pathways, intrinsic and extrinsic. iNOS enzyme activation and nitric oxide synthesis in various cell types as a defense mechanism against microbial and viral pathogens plays important role in inflammatory and immune pathologies such as atherosclerosis, rheumatoid arthritis, diabetes, septic shock and multiple sclerosis, highly and uncontrolled production of nitric oxide leads to cell death. Recently, MSM and GA and CS which are acclaimed to be beneficial for inflammatory disorders arthritis and romatoid arthritis are used widely clinically. There is limited information regarding the effect mechanisms of MSM on apoptotic pathways. Furthermore as these three chemical agents are widely prescript together, it is important to analyse the effects of MSM, GA and CS both alone and in combination. In this study, effects of different concentrations of MSM, GA and CS alone or in combination were tested on LPS/IFN? activated RAW 264.7 macrophages. Fort his purpose nitrite levels, cell viability, caspase-3 activity, mitochondria membran potential and flow cytometric analysis with Annexin V-PI cell staining was performed. All of the compounds tested inhibited nitrite levels, most potent inhibition was achieved with 100 mM MSM. MSM acted as apoptotic or antiapoptotic in LPS/IFN? activated macrophages depending on the dose tested whereas GA increased mitochondrial membrane potential, decreased caspase-3 enzyme activity and exhibited antiapoptotic effects. CS did not effect any apoptotic revealers alone, however its combination with MSM and/or GA showed antiapoptotic effects which might be largely attributed to GA. As the inhibitor effect of GA on activated cells is not potent, the antiapoptotic effects of GA is partly nitric oxide dependent however nitric oxide independent pathways are thought to be responsible. MSM and GA both inhibited NO levels but they showed opposite effects in terms of cell viability and apoptosis. This can be explained with activation of various different biological signal pathways in macrophages with LPS/IFN? and the probable effects of the chemicals on different signaling pathways. In this regard, further elaborate studies are needed to clarify the effects of MSM, GA and CS on mechanisms in specific pathways.
  • No Thumbnail Available
    Item
    Sodyum benzoatın HCT116 kolon kanser hücrelerinde canlılık üzerine etkisi
    (Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 2017) Yılmaz, Betül; Karabay, Arzu Zeynep; Other
    Günümüze kadar, sodyum benzoatın biyolojik rollerine ilişkin çeşitli in vitro ve in vivo çalışmalar yapılmıştır. Bu çalışmalarda sodyum benzoatın glial hücrelerde, astrositlerde ve peritoneal makrofajlarda anti-inflamatuvar etkiler gösterdiği; nörodejeneratif hastalıklarda nörotropik faktörleri uyararak oksidatif stresi azalttığı bildirilmiştir. Sodyum benzoatın anti-inflamatuvar etkilerine aracılık eden yolaklar arasında NFkB yolağının inhibisyonu da yer almaktadır. NFkB, hücre proliferasyonunun regülasyonu, hücrenin sağ kalımı, kemoterapiye direnç oluşumu, metastaz, anjiyogenez gibi çok sayıdaki biyolojik olguda görev yapan bir transkripsiyon faktörüdür. Hücresel streslere yanıt olarak aktive olduğunda sitozolden nukleusa göç ederek, burada hücrenin kaderini belirleyecek çok çeşitli genlerin ekspresyonunu uyarmaktadır. Aralarında kolon kanserinin de yer aldığı pek çok kanser tipinde NFkB' nin aktive olduğu bildirilmiş ve bu aktivasyon kanserle ilişkilendirilmiştir. Bu nedenle NFkB' nin hedeflenmesi anti kanser terapiler için önemli bir yaklaşım oluşturmaktadır. Diğer taraftan, NFkB aktivasyonuna paralel olarak apoptoz indüksiyonun gerçekleştiği çeşitli kanser hücre modellerinin varlığı ve bunun yanısıra NFkB aktivasyonunun uyaran tipine bağlı olarak anti ya da pro apoptotik etkiler sergileyebildiği de bildirilmiştir. Bütün bu bilgilerden hareketle, sodyum benzoatın HCT116 kolon kanser hücre ölümü üzerindeki etkileri NFkB proteini ve bu proteinin hedefleri arasında yer alan Bcl-2 üzerinden araştırılmıştır. HCT116 kolon kanser hücrelerinin 6.25 mM-50 mM konsantrasyon aralığındaki sodyum benzoat ile inkübasyonu sonucunda, hücre canlılığının anlamlı olarak azaldığı, kaspaz 3/7 enzim aktivitesinin anlamlı olarak arttığı ve apoptotik hücrelerin sayısının anlamlı olarak arttığı bildirilmiştir. Sodyum benzoatın, apoptozda görev alan NFkB proteininin sitozolden çekirdeğe göçü üzerinde ise aktive edici etkiler sergilediği ve apoptotik etkileri üzerinde NFkB aktive edici etkilerinin de rol alabileceği belirlenmiştir. Sodyum benzoatın 6.25 mM-50 mM arasındaki dozlarda Bcl-2 proteini üzerinde anlamlı değişiklik yaratmadığı belirlenmiştir. Sodyum benzoatın apoptotik etki mekanizmasına yönelik yeni çalışmaların ve NFkB ilişkili yolakların belirlenmesi de ileri çalışmalar için önerilebilir.