Kuraklıkla ilişkili MİR408 geninin nohut (Cicer arietinum L.) bitkisine Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla aktarılması
No Thumbnail Available
Files
Date
2014
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Fen Bilimleri Enstitüsü
Abstract
Nohut (Cicer arietinum L.) protein, vitamin ve mineral maddelerce zengin önemli bir yemeklik tane baklagil bitkisidir. Nohut bitkisi baklagil üretiminin üçte birini oluşturmakta ve yetersiz beslenme sorunlarının giderilmesinde önemli rol oynamaktadır. Yaşam süreleri boyunca nohut bitkisi kuraklık stresinden olumsuz yönde etkilenmektedir. Bu stresi torele edebilmeleri için bitkiler nohut dahil olmak üzere karmaşık bir gen regulasyon kompleksi içermektedirler. MikroRNA'lar kodlanmayan küçük RNA ailesinde olup, hedef genlerinin ifadelerini trankripsiyon sonrası düzeyde regüle etmektedirler. Bu ailenin üyesi olan miR408 abiyotik stres çalışmaları sonucunda kuraklık stresine karşı ifade seviyesinin arttığı tespit edilmiştir. Fakat miR408'in günümüze kadar biyolojik işlevi ve fonksiyonu bilinmemektedir; ancak, kuraklık stresinde mir408 ekspresiyon seviyesinde artrış izlenmektedir. Bu çalışmada, ilk aşamada BAP, GA3 ve BAP + GA3 ön muamelesiyle ve daha sonra farklı oranda BAP + NAA içeren MS ortamında yüksek oranda Gökçe, Yaşa, Er99 ve Akçin nohut çeşidlerinde plumula ve embriyonik eksen eksplantlarından yüksek oranda bitki rejenerasyonu elde edilmiştir. Çalışmanın 2. aşamasında ise nohut bitkisinin Gökçe çeşidine ait embriyo eksplantları kullanarak Agrobacterium tumefaciens'nın LBA4404 suşunun miR408 pEARLYGATE103 içeren hattıyla kuraklığa daynıklı transgenik bitkiler elde edilmiştir. Çalışmada, transgenik miR408 içeren bitkileri, 17 gün kuraklık koşulları altında tutulmuştur. Transgenik bitkileri, kontrol bitkileri ile karşılaştırıldığında her hangi bir kuraklık belirteçi göstermeden hayatta kalmayı başardıkları izlenmiştir.qRT PCR analizi sonucunda transgenik bitkilerinde yüksek seviyede miR408 ekpresiyonu iznemiş olup, buna karşın hedefi olan plantacyanin genin ekspresiyon seviyesinde azalma tespit edilmiştir.
Description
Keywords
Biyoteknoloji, (Cicer arietinum L.), MİR408